免疫組化技術(shù)要點(diǎn)和常見問題

在免疫組化過程中，為了更好的說明問題和查找原因，設(shè)置陽性對(duì)照片（已知的高表達(dá)相應(yīng)抗原的組織）和陰性對(duì)照組織片（不加一抗但是加二抗系統(tǒng)/不加任何抗體兩組），所有操作過程應(yīng)*一致。
染色弱或者沒有染色（按照先后順序，先排除一些簡(jiǎn)單的原因）：

試劑使用順序錯(cuò)誤或者漏加試劑重復(fù)實(shí)驗(yàn)，保證每一步均正確
二抗和一抗不匹配選擇匹配的二抗
底物和酶不匹配選用匹配的底物
酶失活換用新的酶（將酶和底物混合，看是否顯色？）
組織中沒有待測(cè)抗原表達(dá)或者表達(dá)水平低使用陽性對(duì)照片
抗體濃度太低增加抗體濃度.使用不同濃度的抗體，決定*濃度
抗體孵育時(shí)間不充分延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間
底物孵育不充分延長(zhǎng)底物孵育時(shí)間
抗體儲(chǔ)存不當(dāng)，導(dǎo)致失效將抗體分裝，低溫保存 （-20 to -70 C） ，避免反復(fù)凍溶。稀釋抗體在4保存1-2周，避免時(shí)間過長(zhǎng)?；蛘吒鶕?jù)說明書進(jìn)行恰當(dāng)?shù)谋４?br />一抗失效換用新的一抗
二抗失效換用新的抗體（能否成功與其它一抗配合？）
脫石臘不充分延長(zhǎng)脫臘時(shí)間或者換用新的二甲苯
組織固定不充分或者不當(dāng)增加固定時(shí)間或者改用不同的固定方法
組織固定過度減少固定時(shí)間。若已固定過度，則需使用正確的或者推薦的抗原修復(fù)方法
復(fù)染試劑與底物系統(tǒng)不匹配選擇正確的復(fù)染試劑（不加復(fù)染劑，看是否有組織染色？）
封片劑不正確選擇正確的封片劑