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培養(yǎng)基如何消除組織培養(yǎng)的污染?

更新時間:2016-05-06      瀏覽次數(shù):1780

  培養(yǎng)基一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊琈EM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI- 1640做懸浮細胞培養(yǎng),各種目的無血清培養(yǎng)的是AIM V培養(yǎng)基(SFM)。在開始進行新的細胞培養(yǎng)時,如何消除組織培養(yǎng)的污染?可以參考下表所列的條件:
如何消除組織培養(yǎng)的污染?

  當重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。

  高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。

 ① 在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。

 ② 分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

  ③ 每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。

  ④ 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。

  ⑤ 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。

  ⑥ 重復步驟4。

  ⑦ 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。

培養(yǎng)基操作建議:
    1、商品化的應根據(jù)使用說明書上的要求進行儲存。標簽上應標有批號,生產(chǎn)日期、有效期及有關特性。所采用的保藏和運輸條件應使限度失去水分并提供機械保護。
    2、配制好之后應保存在2~25℃避光的環(huán)境。若保存于非密閉容器中,一般在三周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中,一般在一年內(nèi)使用,瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放,防止冷凍破壞凝膠特性。若要長期保存,瓊脂平板應密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分流失。
    3、保存于密閉容器中,可防止水分流失以延長保存時間。
    4、滅菌后應立即取出,不得儲藏在高壓菌器中,避免影響質(zhì)量。制備好之后應保存在2~25℃、避光的環(huán)境。
    5、固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進行,只允許一次,融化后應放在45~50℃的水浴中,不得超過8小時。

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